علم الأنسجة العام General Histology
- من طرف ابراهيم تكساس
- 3408 مشاهدة
علم الأنسجة العام
General Histology:-
طريقة الإسجاء في شمع البرافين (Paraffin Wax Embedding Technique) •هذه الطريقة هي الأكثر إستعمالا في عملية تحضير الشرائح للإستعمال المعملي الروتيني، تشتمل هذه الطريقة علي عدة خطوات هي: •طريقة أخذ العينه (جمع العينه (Sample collection •التثبيت :(Fixation) •الثبيت هو عملية وضع العينات في محاليل تحافظ عليها في وضع أقرب للحالة الطبيعية مثل الفورمالدهيد (Formaldehyde) ومحلول جندر(Gendre) ومحلول بووين((Bouins’ solution. أهداف التثبيت: 1/ يمنع التحلل الذاتي (autolysis) و التعفن (putrefaction). 2/ يحفظ العينة في حالة أقرب لحالتها الطبيعية. 3/ بعض العينات تصبح أكثر صلابة مما يساعد علي قطعها فيما بعد مثل الكبد و الكلية. 4/ التثبيت يحول مكونات الخلية شبه السائلة إلي شبه صلبة. 5/ يغير التثبيت من المناسب الإنكسارية لبعض مكونات الأنسجة. 6/ تحسن غالبية المثبتات من نوعية التصبيغ (staining). • مساوى التثبيت: 1/ بعض المثبتات تسبب إنكماش العينات. 2/ بعض المثبتات تقلل من جودة التصبيغ. 3/ بعض العينات تصبح أكثر صلابة إذا تركت أكثر من الزمن المطلوب في بعض المثبتات. 2/ التجفاف (Dehydration): هو إزالة الماء من العينات قبل إشرابها بشمع البرافين لأنه لا يذوب في الماء ويتم التجفاف بإستعمال تركيزات مختلفة من كحول الإيثانول: 70% و 90% ثم إيثانول مطلق, وذلك بوضع العينة لمدة ساعتين في كل تركيز. 3/ التصفية .(Clearing) •تتم إزالة الإيثانول بواسطة أحد مذيبات الشمع والتي لبعضها خاصية زيادة المناسب الإنكسارية للأنسجة وهذا يجعلها أكثر صفاء. •من مواد التصفية: الزايلين (xylene) والكلوروفورم .(chlorophorm) •يجب أن تكون كمية مادة التصفية من 50 إلي 100 مرة مثل حجم العينة. • 4/ الأشراب بالشمع (Impregnation with wax): •يتم إشراب العينات بواسطة شمع البرافين المذاب في فرن درجة حرارته ما بين º54 إلي º60 علي أن تكون أعلي بقليل من درجة ذوبان الشمع المستعمل. •يتم تغيير الشمع مرتين بحيث يترك لمدة ساعة في كل مرة من المرات الثلاثة. 5/ القولبة (Blocking): توضع العينة في شمع ذائب مصبوب في قالب وهناك عدة قوالب يمكن إستعمالها لكن أكثرها إستعمالا قالب مكون من قطعتي نحاس كل واحدة علي شكل حرف L تسمي قطع Leukhart. 6/ قطع العينات إلي شرائح(Section cutting) : يتم قطع الشرائح من العينات بواسطة جهاز يسمى الميكروتوم (microtome) ومنه عدة أنواع أكثرها إستعمالا الميكروتوم التدويري(Rotary microtome) . •تقطع الشرائح بسمك 7-5 ميكرون. •يتم فرد العينة في حمام مائي درجة حرارته أقل ب 5 أو 6 درجات من درجة إذابة الشمع المستخدم ثم تحمل علي شريحة زجاجية. 7/ التصبيغ (Staining): الهدف من التصبيغ هو إعطاء ألوان مختلفة لمكونات العينة وبصفة عامة فإن الصبغات الحمضية dyes) (acid تصبغ المكونات القاعدية مثل السايتوبلازم أما الأصباغ القاعدية (basic dyes) فتصبغ المكونات الحمضية مثل النواة. •أكثر الصبغات إستعمالا هي صبغة الهيماتوكسلين و الإيوسين(hematoxylin and eosin) {H&E} .
خطوات صبغة الهيماتوكسلين و الإيوسين: 1/ يزال الشمع بالزايلين xylene وتترك الشريحة في الزايلين لمدة 5 دقائق. 2/ إرجاع الماء للعينة (rehydration) بواسطة التمرير في تراكيز متدرجة تنازليا من الإيثانول: 100%,90%,70% ثم وضع الشرائح في الماء. 3/ وضع الشرائح في إناء به هيماتوكسلين لمدة 10-15 دقيقة, تغسل بماء جاري لمدة 30 دقيقة, ثم تغسل بحامض كحولي 1%. 4| توضع الشرائح على ماء جارى لمدة 10دقائق 5/ وضع الشرائح في إناء إيوسين لمدة دقيقة أو دقيقتين. 6/ إزالة الماء من العينة بواسطة الإيثانول. 7/ إزالة الكحول بواسطة الزايلين. 8/ تغطي العينة بواسطة الساترة (cover slip) وتلصق علي الشريحة الزجاجية بواسطة مادة لاصقة تسمي كندا بلسم (Canada balsam) مصطلحات مستعملة في قياس الشرائح و الأجزاء المختلفة للخلية: المليمتر (mm)= 1000 ميكرون (um) الميكرون (um)= 1000 نانومتر (nm) الميكرون =(um)10000 أنجستروم (Å) النانومتر (nm)=10 أنجستروم (Å)
•
